La clasificación y evaluación de los embriones son sin duda los procedimientos más difíciles para aquellos técnicos y profesionales que comienzan a trabajar con esta biotecnología reproductiva. En realidad no es algo muy complicado pero requiere habilidad y experiencia.
Los embriones se buscan con un estereomicroscopio en magnificación 10-15X. Teniendo el medio en una caja de Petri se pone una placa cuadriculada bajo ésta para facilitar la búsqueda y clasificación. Luego de haber encontrado el último embrión se busca una o dos veces más para descartar que alguna futura cría se nos haya quedado en el medio.
Un Oocito mide aproximadamente 150-190µm y tiene una zona pelúcida de aproximadamente 12-15µm. Este diámetro permanece sin variaciones considerables desde que tiene una célula hasta que se encuentra en fase de blastocisto expandido. El técnico puede contar las células del embrión sin dificultad hasta que este tiene 16 células, luego de esto, las células se dividen asincrónicamente e identificarlas se hace un poco difícil. Cuando las células comienzan a adherirse entre ellas y comienzan a perder su forma esférica el embrión recibe el nombre de mórula.
La zona pelúcida se observa como una estructura transparente que rodea a las células. Entre la zona pelúcida y las células existe un espacio llamado espacio perivitelino. Este espacio perivitelino es identificable hasta que el embrión o embriones se encuentra en estado de blastocisto.
1. Zona pelúcida; 2. Masa celular; 3. Espacio perivitelino.
Estados de los embriones
Los estados de desarrollo de los embriones se identifican, después de tener 16 células, de acuerdo al desarrollo morfológico.
Mórula (Estadio 4): Las células (blastómeras) son difíciles de distinguir unas de otras. El embrión tiene aproximadamente 5 días.
Mórula compacta: Las blastómeras se juntan y forman una masa celular sólida. El embrión ocupa aproximadamente un 60% del espacio perivitelino.
Mórula (Estado 4)
Blastocisto temprano (Estadio 5): Presenta una cavidad en donde se encuentra un fluido llamado blastocele. El embrión ocupa el 70-80% del espacio perivitelino. Se puede diferenciar el trofoblasto y el macizo celular interno. Luego de esta etapa viene el Blastocisto (Estadio 6) propiamente dicho. La única diferencia entre estos dos estados es básicamente el tamaño de la cavidad.
Blastocisto. Nótese la cavidad y el fluido (1).
Blastocisto expandido (Estadio7): El diámetro aumenta hasta en un 150%. La zona pelúcida se adelgaza hasta un 66% con respecto al grosor que tenía en el Estado 4. Estos embriones tienen una edad estimada de 8 a 9 días.
Nótese en esta imagen el adelgazamiento de la zona pelúcida
Blastocisto eclosionado (Estadio 8): La masa celular puede estar por fuera de la zona pelúcida o en proceso de salir. Luego viene un estado llamado
Blastocisto eclosionado expandido (Estadio 9).
El grado de desarrollo de un embrión o de los embriones se determina por números en donde el número 1 identifica un oocito sin fertilizar, el número 2 nos identifica un embrión con hasta 16 células (2 a 5 días). El número 3 identifica una mórula temprana y los números del 4 al 9 nos identifican embriones que ya presentaron compactación. En un lavado convencional los embriones son colectados entre los días 6 y 8, o sea entre mórula y blastocisto.
En resumen los estadios de los embriones son los siguientes:
Estado 1: Infertilizado
Estado 2: de 2 a 16 células
Estado 3: Mórula temprana
Estado 4: Mórula
Estado 5: Blastocisto temprano
Estado 6: Blastocisto
Estado 7: Blastocisto expandido
Estado 8: Blastocisto eclosionado
Estado 9: Blastocisto eclosionado en expansión
1. Mórula compacta; 2. Infertilizados; 3. Mórulas tempranas; 4. Infertilizado.
Nótese en la imagen anterior que en la mórula compacta no podemos diferenciar bien las células mientras que en las mórulas tempranas sí. Los infertilizados los identificamos porque su interior es un óvalo bien delimitidado y al observarlo detenidamente vemos que ése interior esta compuesto no por bordes (segmentos) sino por gránulos (estructura de puntillismo).
Hasta aquí hemos visto a grosso modo la clasificación de los embriones según su estado. Ahora veamos la calificación que le damos a los embriones de acuerdo a su calidad.
Clasificación de embriones según su calidad
La evaluación la damos de acuerdo a sus características morfológicas. Estas características son subjetivas y pueden variar de un técnico a otro. Las características que debemos tener en cuenta para calificar un embrión son:
- Forma del embrión
- Color y textura de la masa celular
- Diferencia de tamaño entre las blastómeras
- Numero y nivel de compactación de las blastómeras
- Tamaño del espacio perivitelino
- Presencia de blastómeras sueltas o separadas
- Presencia o ausencia de vesículas
- Forma y estado de la zona pelúcida
Si en la clasificación utilizábamos una escala numérica del 1 al 9 en la calificación vamos a utilizar una escala numérica que va del 1 al 4:
Calidad 1
Embriones excelentes y buenos. Son embriones esféricos, simétricos con células de tamaño, color y texturas uniformes. Puede haber pequeñas imperfecciones como algunas blastómeras sueltas, tamaño irregular o algunas vesículas. Estos embriones son los ideales para congelar.
Calidad 2
Embriones regulares. Tienen problemas más definidos incluyendo blastómeras sueltas, vesículas o células degeneradas. Estos embriones pueden ser congelados pero se obtendrán resultados bajos. Sin embargo son embriones aceptables para ser transferidos en fresco (de donadora a receptora directamente sin congelación).
Calidad 3
Embriones malos. Numerosas blastómeras sueltas, células degeneradas. Células de distinto tamaño, color y textura, formas irregulares. Numerosas vesículas. No se deben congelar y al ser transferidos en fresco nos dan resultados pobres.
Calidad 4
Muertos o degenerados. Son embriones cuyas blastómeras se encuentran en desorden y sueltas. Hay muchas vesículas. Puede tener un aspecto granular como los infertilizados y tener un crecimiento retardado con respecto a los otros embriones de la colecta. No se congelan ni se transfieren en fresco.
En la imagen anterior vemos diferentes estructuras dentro de las cuales se identifican mórulas, blastocistos, infertilizados y degenerados.
Teniendo en cuenta lo visto en cuanto a clasificación y calificación en la práctica podemos encontrarnos, entre otros, con los siguientes embriones:
- 4:1 mórula de excelente calidad. Transferible y congelable.
- 4:2 mórula regular. Resultados bajos al congelar y resultados buenos al transferir en fresco.
- 4:3 mórula mala. No congelable y resultados bajos al transferir en fresco.
- 4:4 muerto o degenerado. No congelable y no transferible.
- 5:1 blastocisto de excelente calidad. Transferible y congelable.
- 5:2 blastocisto regular. Resultados bajos al congelar y buenos al transferir en fresco.
- 5:3 blastocisto malo. No congelable y resultados bajos al transferir en fresco.
- 5:4 muerto o degenerado. No congelable y no transferible.
También podemos encontrar embriones de otro tipo como 6:1 ó 7:3 pero el ejemplo aplica para todos.
